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微生物技術資料
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常用檢驗方法



錄入時間:2008-10-30 15:05:35 來源:青島betway必威西汉姆联

   1.細菌分類
    Reiner等用熱解氣相色語法對分枝杆菌進行分類,發現分枝杆菌屆中各茵均具有獨
持的熱解物指紋圖型,成功地對分枝杆菌作出了準確分類。
    2.細菌的鑒定
    (1)厭氧菌的鑒定
    氣相色譜能通過測定厭氧菌的代謝產物,即抨發性脂肪酸與非揮發性脂肪酸的不同
對其準確並快速地進行鑒定;如類杆菌科中的細菌產生丁酸而不產生異丁酸和異戊酸的
細菌為校杆菌屬,不產生丁酸或產生丁酸的同時又產生異丁酸和異戊酸的細菌為類杆菌
屬。
    (2)霍亂弧菌的鑒定
    根據霍亂弧菌熱解色譜圖中出現的複合體“7”的差異,可以準確地鑒定古典型(7a<
7B)、ElTor型(7a>7B)、中間型(7a和7B大小相近)、氣單胞菌(隻有7B而無7a)。
    3.傳染病的快速診斷
    各種病原微生物在其生長的環境裏,常可形成各自獨特的化合物或代謝產物,僅需
ng或p8的水平就可在色譜固上顯示出來。氣相色語法可以檢出體液、組織或離體培養物
中病原微生物特征性代謝活性有關的某些微小的化學變化,因此,氣相色譜技術可對臨
床標本進行直接檢查,從而對傳染病作出快速診斷。
    三、放射測量法
    放射測量法的原理是根據細菌在生長繁殖過程中,可利用培養基中加有’‘c標記的
碳水化合物或鹽類底物代謝產生”cO 2,然後通過放射測量儀(Bactec 301或Bactec 225、
Bactec 460)測量“cO 2含量的增加與否,來確定標本中有無細菌的存在。這樣可迅速進
行細菌計數,檢測時問隨接種量、繁殖率和代謝類型而變化,但仍比常規方法要快,一
般隻需6h一18h。
    四、電阻抗技術
    電阻抗是交流電路中導電物質對電流所起的阻礙和抵抗作用。微生物可使培養基中
的電惰性底物,如碳水化合物、蛋白質等營養物質,代謝成為電活性產物,如乳酸鹽或
氨等。當微生物的生長和代謝活性旺盛時,培養基中的電惰性分子即為許多電活性分子
所取代,從而使培養基的電導性增大,培養物的電阻抗降低。單位時間內阻抗疽的改變
與培養基中含茵量成正比。由於不同的微生物在培養基中的代謝活性有所不同,故可利
用電阻抗測量法對其進行鑒定。
    根據上述原理,由Bactomeic Inc(美)製造的細菌記數儀(Bactometer Model
8.32),細菌(10000以上)計數準確率(與標準平皿計數比較)在g3%以上。Bactomer由
孵育器、一對插入培養基的不鏽鋼電權、阻抗監測係統和一個微處理機組成。據資料報
道,在篩選牛奶樣品時(2l℃)用Ba口omer可在22h之內區分出含菌大於10“和小於10。
的樣品,準確率達88%;在13.7h內區分出大於10000和小於10000的試樣,準確率達91%。
    五.免疫學標記技術
    用熒光家標記已知抗體(或抗原),與特異抗原(或抗體)結合後產生熒光。Munron
(1976)用自動熒光抗體係統檢測食品中的沙門氏菌,每小時能檢測120個玻片檢樣,與
常規試驗比較,準確率達96%。
    熒光抗體(或抗原)十被檢物,如特異結合,熒促反應顯色,結果陽性。Kjyrinrki和
heimrch(1977)用熒光抗體係統檢測食品中的沙門氏茵。該係統中有一個直徑47mm的
薄膜濾器,在濾器上可同時檢測14個樣品。Saunders和Bartlett(1977)用夾心抗體固
態熒光免疫分析技術,在1h一3h內可檢出3.2ug的細菌毒家,20h內檢出o.4ug的細菌
毒素。
    六、噬苗體法
    何曉青等(1984)發現一種稱作腸杆菌科分屆診斷噬菌體。鑒定沙門氏菌等隻需
6min,加上培養茵落時間隻要2d。
    具體方法:挑取鑒別培養基上的可疑菌落,作陳水培養(37℃過夜)。若菌液混濁,
作1;200稀釋,再用滅菌棉簽在烘幹的瓊脂平皿上作條狀塗布,依次加噬菌體O一1、C、
E、CE,E4和Em。如表7進行判斷。
   
    七、當試劑分析法
    當試劑中加入細菌內毒家可出現膠凝反應。膠凝程度(凝集價)與樣品中內毒家含
量成正比。陰性菌為引起食品腐敗變化的主要菌相,內毒家是革蘭氏陰性茵的細胞壁成
分,通過平行試驗可找出內毒素與陰性菌數及茵落總數的相關性。據報道特定地區和工
藝流程的各類食品,同時用當試劑和標準平皿計數檢測,出現較穩定的相關性。汪誠天
等(1983)用當試劑分析法檢出食品中小於o.1ug的毒索,整個檢測過程在3h內完成。
為提供食品衛生質量的可靠評價,此法不失為一快速、靈敏、簡易的篩選檢測方法。
 
   

 

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