一、滅菌方法簡介
培養基在使用之前必須進行滅菌處理，將其所含活菌全部殺死或全部除去。常用的滅菌方法有過濾除菌、幹熱滅菌、濕熱滅菌及輻照滅菌等。其中，濕熱滅菌法又包括四種方式：煮沸法、流動蒸汽滅菌法、間歇滅菌法和壓力蒸汽滅菌法。通常來說，使用比較多的是壓力蒸汽滅菌法。
但是對於有些培養基來說，高壓條件會損壞培養基中的某些成分，不利於培養基的使用，所以隻能采用煮沸滅菌的處理方法。本文主要就煮沸滅菌方法進行討論。
二、煮沸滅菌的常見表述
有關煮沸滅菌的描述，通常有如下幾種方式：
a、稱取本品41.5g，加熱溶解於1000ml蒸餾水中，煮沸不要超過2分鍾。無需高壓滅菌。臨用時製備，不得超過3小時。（參考VRBA培養基：點擊查看）
b、稱取本品50.3g，加入1000ml蒸餾水中，加熱煮沸至完全溶解，冷至45-50℃，搖勻，傾入無菌平皿備用。無需高壓滅菌。（參考BS培養基：點擊查看）
c、稱取本品89g，煮沸溶解於1000ml蒸餾水中，冷至45-50℃時，傾入無菌平皿，備用。注：無需高壓滅菌。（參考TCBS培養基：點擊查看）
d、稱取本品57g，加熱攪拌溶解於1000ml蒸餾水中，不要過分加熱，冷至50-55℃時，傾入無菌平皿,部分開蓋幹燥2h，然後蓋上，備用。無需高壓滅菌。在 24小時內使用。（參考XLD培養基：點擊查看）
這些方法描述中，都特別強調“無需高壓滅菌”、“不要過分加熱”、“煮沸充分溶解”，那麽究竟該怎樣操作，才能達到既滅菌完全又盡量降低對培養基的破壞呢？
三、煮沸滅菌的實際操作
1、關於煮沸方式，有人提出可以隔水煮沸，但經過反複試驗，發現這種煮沸方式存在兩大弊端：①溫度不夠，達不到滅菌效果；②經隔水煮沸的含瓊脂培養基，在水浴的過程中易出現分層現象。
2、為了對培養基進行有效煮沸滅菌，根據我們實踐摸索，建議如下操作：
①準備好電磁爐和搪瓷缸（不要用鐵質容器）；
②將培養基按比例加水，稱量至搪瓷缸中，用玻璃棒不斷攪拌，直至完全溶解、無明顯團狀物或顆粒；
③將搪瓷缸置於電磁爐上，大火燒開，期間持續攪拌，避免糊底；當液麵完全沸騰後，立即將搪瓷缸從電磁爐上拿開，算是一次煮沸操作；液麵回落後，立即放回電磁爐，重複上麵的步驟；總共煮沸3次即可。
④將煮好的培養基冷卻至需要的溫度，進行傾注平皿等操作。
四、注意事項
1、補水
加熱煮沸的過程，培養基中的部分水分會蒸發掉，造成水分偏少，影響培養基的質量（如平板強度等），導致菌落形態等結果的偏差，因此為了盡量減少誤差，需要在煮沸之前，向搪瓷缸中補加適量培養基配製用水，經驗估計，通常每煮一缸培養基需補加15-20ml水，實際操作中，需根據各實驗室的具體情況（容器大小及裝量）進行摸索。
2、溶解
所有的培養基，在煮之前必須攪拌至完全溶解，不允許將尚有成團培養基的狀態下，直接進行加熱煮沸，那樣很容易出現滅菌不徹底的現象，尤其是有些含瓊脂的培養基，甚至會有部分瓊脂不能徹底溶解，導致倒出的平皿上有明顯的麩皮狀瓊脂小顆粒，或者有些含有染料的培養基也可能出現染料顆粒，都會影響培養基的使用（所述各種情況見下圖）。
正確操作：
錯誤操作：
平板上出現未完全融化的瓊脂顆粒：
3、攪拌
煮沸全程必須持續不斷攪拌，以免糊底。
4、防燙
液麵沸騰後，要及時將搪瓷缸從電磁爐上取下，以免液體沸出，造成培養基沾染或燙傷操作人員。
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