關於中和劑中和效果試驗方法解析

一、實驗目的

  為了準確評價消毒劑對微生物的滅殺作用，消毒劑試驗中要求選擇適當中和劑，所選中和劑不僅能及時中止消毒劑的殺微生物作用，且中和劑本身及其與消毒劑的反應產物（以下稱中和產物）尚需對微生物無抑製或滅殺作用，對培養基無不良影響。

二、實驗方法

  1、用接種環挑取指示菌接入PBS中製成適量濃度的菌懸液；

  2、將消毒液用滅菌蒸餾水配製成3種不同濃度，在不加中和劑的情況下，測知消毒劑10min抑殺指示菌的最低有效濃度；

  3、取消毒劑10min抑殺指示菌的最低有效濃度與待選擇中和劑進行試驗，選出中和劑種類並依據等當量中和原則，調整中和劑濃度，選出試驗濃度的消毒劑使用中和劑的濃度；

  4、在進行中和劑選擇試驗時，先將消毒劑1ml與中和劑溶液9ml混合，製成中和產物溶液。

加入消毒劑混勻前

左：複方中和劑 右：生理鹽水

加入消毒劑混勻後

左：中和產物 右：生理鹽水

  5、現以複方中和劑為例，按照下表所示進行試驗：

組號	0.5ml菌液加於	混勻作用10min	取0.5ml混勻液加入 （加入後總量為5ml）	作用10min後 取原液或者稀釋液0.5ml接種平板（2個/樣本）
1	消毒液4.5ml		PBS 4.5ml	原液*10
2	消毒液4.5ml		中和劑4.5ml	原液*10
3	中和產物4.5ml		PBS 4.5ml	*100，*1000
4	PBS 4.5ml		PBS 4.5ml	*100，*1000
5	中和劑4.5ml		PBS 4.5ml	*100，*1000
6			PBS 5.0ml	原液

混勻作用前

1：消毒液4.5ml 2：消毒液4.5ml 3：中和產物4.5ml 4：PBS 4.5ml 5：中和劑4.5ml

混勻作用後

1：PBS 4.5ml 2：中和劑4.5ml 3：PBS 4.5ml 4：PBS 4.5ml 5：PBS 4.5ml 6：PBS 5.0ml

  6、中和實驗結果舉例（以複方中和劑為例）：

三、實驗結論及判定標準

  1、根據數據顯示，3、4、5組菌數相似，其誤差率小於等於10%。

  2、6組無菌生長。

  3、1組不長菌或者明顯少於2組。

  符合上述標準的中和劑表明可消除消毒劑對指示菌的作用，中和劑及其與消毒劑中和產物對指示菌無毒害，判定為該消毒劑的中和劑。

四、補充實驗

  使用中消毒液染菌量檢查方法：

  1、用移液槍按照無菌操作方法吸取1ml被檢消毒液，加入9ml中和劑混勻；

  2、按照無菌操作使用移液槍吸取中和產物1ml接種平皿，將冷至40℃-45℃的熔化營養瓊脂培養基每皿傾注15ml-20ml，36℃恒溫箱培養72h，計數菌落。

   消毒液染菌量（CFU/ml）=平均每皿菌落數*10*稀釋倍數

  注意事項：醇類與酚類消毒劑用普通營養肉湯中和，含氯消毒劑、含碘消毒劑和過氧化物消毒劑用含0.1%硫代硫酸鈉中和劑，洗必泰、季銨鹽類消毒劑用含0.3%吐溫80和0.3%卵磷脂中和劑，醛類消毒劑用含0.3%甘氨酸中和劑，含有表麵活性劑的各種複方消毒劑可以在中和劑中加入吐溫80至3%。

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