無菌室在消毒處理後，無菌試驗前及操作過程中需檢查空氣中菌落數，以此來判斷無菌室是否達到規定的潔淨度，常用沉降菌法。一般無菌室的空間潔淨度要求達到10000級，萬級潔淨度對空間菌落的要求是：靜態檢測，自然沉降菌CFU/皿；操作區域如超淨工作台、生物安全櫃裏需要達到潔淨度100級，百級潔淨度對空間菌落的要求是：靜態檢測，自然沉降菌CFU/皿。
一、沉降菌檢測方法
以無菌方式將3個營養瓊脂平板帶入無菌操作室，在操作區台麵左、中、右各放1個；打開平板蓋，在空氣中暴露30min後將平板蓋好，置36℃士1℃培養48h，取出計數。
二、無菌室的滅菌方式
1、紫外線照射
紫外線滅菌是利用適當波長的紫外線破壞微生物機體細胞中的DNA或RNA結構，造成生長性細胞死亡來達到滅菌效果，屬於一種物理方式的滅菌。該方法可以殺滅各種微生物，包括細菌、病毒、真菌、立克次體及支原體等，是實驗室中最常用的滅菌方式。根據2002年國家衛生部發布的《消毒技術規範》，紫外燈的要求是紫外強度不得低於70uW/c㎡（紫外燈1m處），空間內的紫外燈布局要求每㎡不少於1.5W。並做到定期（至少每年1次）更換新的紫外燈管，以確保紫外燈管滅菌持續有效。
2、臭氧滅菌
臭氧是一種強氧化劑，通過氧化分解細菌內部葡萄糖所需的酶，使細菌滅活死亡。使用臭氧滅菌，殺菌徹底，無殘留，殺菌廣譜，可殺滅細菌繁殖體和芽孢、病毒、真菌等，並可破壞肉毒杆菌病毒。另外，臭氧對黴菌有極強的殺滅作用。用臭氧消毒空氣，必須是在封閉空間，且室內無人條件下進行，消毒後至少30min才能進入。一般滅菌時間選擇30min即可，要求空間中臭氧濃度不低於20mg/m3。
3、化學熏蒸
采用易揮發氣化的化學物質的蒸汽，對空間微生物進行殺滅的目的，常用甲醛、過氧化氫、過氧乙酸等。這種方法明顯的缺點是易殘留，對人體傷害大。每次熏蒸後，至少需要通風24h才可以使用。所以隻有在其他滅菌方法無法達到理想的滅菌效果時，才會考慮這種方法。
無菌室作為微生物檢測的空間，每一個質檢員都要了解它的狀態，才能保證實驗結果的準確度。
注：本文屬betway必威西汉姆联生物原創，未經允許不得轉載。
下一篇：影響微生物生長的主要因素
