一、培養基用途
用於金黃色葡萄球菌耐熱核酸酶的檢測。金黃色葡萄球菌是引起人、畜患病的常見的病原體之一，同時也是食品等檢驗標準的重要監測病原體之一。而耐熱核酸酶是產腸毒素金黃色葡萄球菌生長的一個典型特征，是檢測金黃色葡萄球菌汙染的標誌特征之一。
二、培養基成分及使用方法
1、培養基成分
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成分 |
含量（g/1000mL） |
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脫氧核糖核酸（DNA） |
0.3 |
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氯化鈣 |
1.1 |
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氯化鈉 |
10.0 |
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三羥甲基氨基甲烷（Tris） |
6.1 |
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瓊脂 |
10.0 |
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pH 9.0±0.1 |
25℃ |
2.使用方法
稱取本品27.58g，加熱溶解於1000ml蒸餾水中，煮沸溶解後冷卻至合適溫度，傾入無菌平板。
三、實驗原理
產腸毒素的金黃色葡萄球菌可產生胞外熱穩定DNA酶，在沸水中水浴15min後仍可保持活性，水解DNA長鏈形成數個單核苷酸組成的寡核苷酸鏈，使甲苯胺藍由藍色變成粉紅色；氯化鈣提供陽離子作為激活劑；氯化鈉維持均衡的滲透壓；三羥甲基氨基甲烷為緩衝劑；瓊脂為培養基的凝固劑。
四、實驗方法及結果
1、按使用方法製備培養基，在瓊脂上打成直徑2mm的小孔，抽出小孔中的瓊脂。
2、每個小孔加入約0.01ml水浴處理（在水浴中煮沸15min）後的可疑菌的肉湯培養物。
3、將平板正置於培養箱中，36℃±0.1培養4小時。陽性反應為在小孔周圍形成至少擴展約1mm的粉紅色的暈圈。
4、金黃色葡萄球菌有粉紅色暈圈，如圖1-a、1-b所示；大腸埃希氏菌無粉紅色暈圈，如圖1-c所示。
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a:金黃色葡萄球菌ATCC6538，b:金黃色葡萄球菌ATCC25923，c:大腸埃希氏菌ATCC25922 圖1 甲苯胺藍-DNA瓊脂的微生物結果 |
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五、注意事項
1、配置培養基時，如不能立即使用可分裝三角瓶，121℃高壓滅菌15min，滅菌後的培養基可於室溫存放4個月無變化。使用時加熱融化傾注平板，此培養基經數次融化後仍可使用。
2、每個平板打孔數量可根據實際情況增減，但需預留出暈圈範圍，以防打孔位置過近影響陰陽性判斷。
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