一、參考標準
根據《GB4789.39-2013 糞大腸菌群標準計數》中定義，糞大腸菌群是一群在44.5℃中培養24—48小時能發酵乳糖產酸產氣的需氧和兼性厭氧革蘭氏陰性無芽孢杆菌。
二、檢驗流程
1、樣本稀釋
固體和半固體樣品：稱取25g樣品，置盛有225mL磷酸鹽緩衝液或生理鹽水的無菌均質杯內，製成1:10的樣品勻液。
液體樣品：以無菌吸管吸取樣品25mL置盛有225mL磷酸鹽緩衝液或生理鹽水的無菌錐形瓶（瓶內預置適當數量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，製成1:10 的樣品勻液。
注意事項：樣品勻液的pH值應在6.5～7.5之間，必要時分別用1 mol/L NaOH或1 mol/L HCl調節；根據對樣品汙染狀況的估計，依次製成十倍遞增係列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋1次，換用1支1mL無菌吸管或吸頭。從製備樣品勻液至樣品接種完畢，全過程不得超過15 min。
2、初發酵試驗
每個樣品，選擇3個適宜的連續稀釋度的樣品勻液，每個稀釋度接種3管月桂基硫酸鹽胰蛋白腖（LST）肉湯，每管接種1mL，36℃±1℃培養24h±2h，觀察倒管內是否有氣泡產生，24h產氣者進行複發酵試驗，如未產氣則繼續培養至48h±2h。
根據標準菌株對月桂基硫酸鹽胰蛋白腖（LST）肉湯培養基進行驗證，結果如圖一：
a:大腸埃希氏菌ATCC25922，b:陰溝腸杆菌ATCC23355，c:弗氏檸檬酸鹽杆菌ATCC43864
d:糞腸球菌ATCC29212，e:空白對照
圖一 月桂基硫酸鹽胰蛋白腖（LST）肉湯微生物質控結果
注意事項：液體樣品可以選擇原液；若是接種量需要超過1mL，則用雙料LST肉湯。
3、複發酵試驗
用接種環從產氣的LST肉湯管中分別取培養物1環，移種於預先升溫至44.5℃的EC肉湯管中。將所有接種的EC肉湯管放入44.5℃±0.2℃培養箱內，培養24h±2h，記錄EC肉湯管的產氣情況。產氣管為糞大腸菌群陽性，不產氣為糞大腸菌群陰性。
根據標準菌株對EC肉湯培養基進行驗證，結果如圖二：
a:大腸埃希氏菌ATCC25922，b:產氣腸杆菌ATCC35029，c:大腸埃希氏菌CMCC44102
d:弗氏檸檬酸杆菌ATCC43864 e：糞腸球菌ATCC29212，f:金黃色葡萄球菌ATCC25923 g：空白對照
圖二 EC肉湯微生物質控結果
注意事項：定期以已知為44.5℃產氣陽性的大腸埃希氏菌和44.5℃不產氣的產氣腸杆菌或其他大腸菌群細菌作陽性和陰性對照。
三、結果判定
根據證實為糞大腸菌群的陽性管數，查糞大腸菌群最可能數（MPN）檢索表，報告每g (mL)糞大腸菌群的MPN值。
在10-1～10-5五個連續稀釋度中確定最適的三個連續稀釋度方法如下：
a）有一個以上的稀釋度3管均為陽性。選擇三管都是陽性結果的最高稀釋度及其相連的兩個更高稀釋度（見表B.1示例a、b，表中帶下劃線的數字對應的接種樣品量為最終選取的最適稀釋度，下同）；
b）在未選擇的較高稀釋度中還有陽性結果時，則順次下移到下一個更高三個連續稀釋度（見表B.1示例c）；
如果中間有某個稀釋度沒有陽性結果，但更高稀釋度有陽性結果，則將此陽性結果加到前一稀釋度，進而確定三個連續稀釋度（見表B.1示例d）；
如果不能按照這個原則找到三個合適的稀釋度，則選擇前一個較低的稀釋度（見表B.1示例e）；
c）沒有任何一個稀釋度3管均為陽性。如果沒有一個稀釋度的3管均為陽性，則選擇三個最低稀釋度（見表B.1示例f）；
如果在更高的沒有被選擇的稀釋度還有陽性結果，將此陽性結果加到選擇的最高稀釋度，進而確定三個連續稀釋度（見表B.1示例g）。
每g(mL)檢樣中糞大腸菌群最可能數（MPN）的檢索見表C.1
舉例說明：若糞大腸菌群的陽性管數的示例為3-3-2-0-1，則選擇的稀釋度為3-2-1，根據MPN檢索表所得MPN數值為1500。
注意事項：MPN檢索表采用3個稀釋度[0.1g(mL)、0.01g(mL)和0.001g(mL)]、每個稀釋度接種3管。並且表內所列檢樣量如改用lg（mL）、0.1g(mL)和0.01g(mL)時，表內數字應相應降低10倍；如改用0.01g(mL)、0.001g(mL)、0.0001g(mL)時，則表內數字應相應增高10倍，其餘類推。
注：本文屬betway必威西汉姆联生物原創，未經允許不得轉載。
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