一、引言
單核細胞增生李斯特氏菌是一種人畜共患病的病原菌，李斯特氏菌中毒嚴重的可引起血液和腦組織感染，感染後主要表現為敗血症、腦膜炎和單核細胞增多。它廣泛存在於自然界中，食品中存在的單增李氏菌對人類的安全不利，該菌在4℃的環境中仍可生長繁殖，是冷藏食品威脅人類健康的主要病原菌之一，因此，在食品衛生微生物檢驗中，必須加以重視。目前，很多國家已經采取措施來控製食品中的李斯特氏菌，並製定了相應的標準。2001年11月以來，中國質檢部門多次從美國、加拿大、法國、愛爾蘭、比利時、丹麥等二十多家肉類加工廠進口的豬腰、豬肚、豬耳、小排等三十多批近千噸豬副產品中檢出單增李斯特氏菌。
二、單增李斯特氏菌簡介
單增李斯特氏菌為革蘭氏陽性短杆菌，大小約為0.5μmх1.0-2.0μm，直或稍彎，兩端鈍圓，常呈V字型排列，偶有球狀、雙球狀，兼性厭氧、無芽孢，一般不形成莢膜，但在營養豐富的環境中可形成莢膜，在陳舊培養基中的菌體可呈絲狀，該菌有4根周毛和1根端毛，但周毛易脫落。
該菌的生長範圍為2-42℃（也有報道在0℃能緩慢生長），最適培養溫度為35-37℃，在pH中性至弱堿性（pH9.6）的條件下生長良好。在固體培養基上，菌落初始很小，透明，邊緣整齊，呈露滴狀，但隨著菌落的增大，變得不透明。在5-7%的血平板上，菌落通常也不大，灰白色，接種血平板培養後可產生窄小的β-溶血環。在0.6%酵母浸膏胰酪大豆瓊脂(TSA-YE)上，用450角入射光照射菌落，菌落呈藍色、灰色或蘭灰色。
三、單增李斯特氏菌的控製
該菌對理化因素抵抗力較強，在土壤、糞便、青儲飼料和幹草內能長期存活，對堿和鹽抵抗力強，60-70℃經5-20min可殺死，70%酒精5min、2.5%石炭酸、2.5%氫氧化鈉、2.5%福爾馬林20min 可殺死此菌。該菌對青黴素、氨苄青黴素、四環素、磺胺均敏感。
單增李斯特氏菌在一般熱加工處理中能存活，熱處理已殺滅了競爭性細菌群，使單增李斯特氏菌在沒有競爭的環境條件下更易於存活，所以在食品加工中，中心溫度必須達到70℃持續2分鍾以上。單增李斯特氏菌在自然界中廣泛存在，所以即使產品已經過熱加工處理充分滅活了單增李斯特氏菌，但有可能造成產品的二次汙染，因此蒸煮後防止二次汙染是極為重要的。由於單增李斯特氏菌在4℃下仍然能生長繁殖，所以未加熱的冰箱食品增加了食物中毒的危險，冰箱冷藏的食品需加熱後再食用。
四、單增李斯特氏菌檢測用的PALCAM瓊脂
GB4789.30-2016食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 單核細胞增生李斯特氏菌檢驗 中PALCAM瓊脂為必選的選擇性分離培養基，選擇性強，可抑製革蘭氏陰性菌和糞腸球菌。
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五、全麵試驗情況
為了進一步驗證該培養基的有效性，自本實驗室中選取7株單增李斯特氏菌在TSB肉湯中活化後接種於PALCAM瓊脂平板，36℃±1℃培養24h-48h觀察不同單增李斯特氏菌的菌落形態是否典型。
具體選取的單增李斯特氏菌菌株如下：
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菌株編號 |
菌株名稱 |
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ATCC 19115 |
單增李斯特氏菌 |
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CMCC 54008 |
單增李斯特氏菌 |
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CMCC 54009 |
單增李斯特氏菌 |
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CMCC 54010 |
單增李斯特氏菌 |
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CMCC 54011 |
單增李斯特氏菌 |
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CMCC 54012 |
單增李斯特氏菌 |
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CICC 21583 |
單增李斯特氏菌 |
經觀察，以上7株單增李斯特氏菌培養後為灰綠色圓形菌落，凹陷，有黑色中心，菌落周圍呈黑色，直徑1-3mm，不同菌株的菌落形態略有差異，但都呈現出典型特征，回收率均在80%以上
具體單增李斯特氏菌的菌落特征參考下圖：
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本培養基要求抑製大腸埃希氏菌和革蘭氏陽性菌-糞腸球菌，避免對李斯特氏菌的檢出產生幹擾，故自實驗室中選取6株大腸埃希氏菌和7株糞腸球菌進行驗證。分別取1μL菌液半定量劃六線，36℃培養40h後計數生長指數G值，結果如下：
非目標菌株在PALCAM瓊脂培養基上的生長情況
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PALCAM瓊脂培養基（產品號：HB4188）平板上生長的7株單增李斯特氏菌的菌落形態呈現典型的菌落特征：灰綠色圓形菌落，凹陷，有黑色中心，菌落周圍呈黑色，直徑1-3mm，回收率均高於80%，符合標準回收率大於70%的要求，13株非目標菌均被抑製，綜合考慮，本培養基的性能良好，可有效檢出樣品中的目標菌。
六、注意事項
在進行李斯特氏菌檢測的過程中，同時需要與李斯特氏菌顯色培養基上分離的典型和可疑菌落純化後進行後續的生化與血清學鑒定，綜合分析判斷是否為李斯特氏菌。
參考文獻：
[1]GB 4789.28-2013 食品微生物學檢驗 培養基和試劑的質量要求.
[2]GB 4789.30-2016 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 單核細胞增生李斯特氏菌檢驗.
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