1.證明文件
1.1生產企業提供的文件生產企業應提供下列材料：
一一培養基、獨立成分、添加劑的名稱及產品編碼；
一一批號；
一一培養基的最終pH；
一一儲藏信息和有效期；
一一質控證書和所用的測試菌株；
一一性能測試的結果與驗收標準；
一一技術數據清單；
一一必要的安全/危害數據。
1.2產品的交付驗收
對每一批產品（成分或培養基），均應檢查：
一一產品的標識；
一一包裝完整性；
一一產品的有效期；
一一支持性文件。
記錄產品的接收日期。
2.貯存
2.1總則
應嚴格按照供應商提供的貯存條件、有效期和使用方法進行培養基的保存和使用。
2.2脫水培養基及其添加劑的質量管理和質量控製
新購買的培養基一般為脫水的粉狀或顆粒狀，保存在密閉的容器中。用於菌種選擇或鑒定的添加成分通常為凍幹物或液體。培養基的購買應有計劃，以有利於存貨的周轉（即掌握先購先用的原則）。實驗室應保存有效的培養基目錄清單，清單應包括以下內容：
一一容器密閉性檢查；
一一首次開封日期；
一一內容物的感官評價。
對於新開封的培養基，應對其質量進行檢查。通過粉末的流動性、均勻性、結塊情況和色澤變化等判斷培養基質量的變化。若發現培養基受潮或物理形狀發生明顯改變則應廢棄。
2.3商品化即用型培養基
應嚴格按照供應商提供的貯存條件、有效期和使用方法進行培養基的保存和使用。
2.4實驗室製備的培養基
培養基的保質期各不相同。不同的標準中均有明確規定了保存的條件和保質期。培養基應保存在防止其成分發生變化的環境下，即應避光、幹燥保存；如有必要，用保存於2℃～8℃冰箱中，或依據培養基要求的儲存條件進行保存。除標準規定或保質期驗證實驗的結果表明有較長的保質期外，通常平板保存不超過2周～4周，三角瓶和試管的保存不超過3個月～6個月。除標準規定或保質期驗證實驗的結果表明有較長的保質期外，含有不穩定添加成分的培養基應即配即用。對發生化學反應或含有不穩定物質的固體培養基也應即配即用，不可二次融化。
實驗室應對貯存培養基的有效期進行規定。觀察培養基顏色變化，是否有蒸發/脫水情況，是否有微生物生長。當培養基發生這類變化時，應停止使用。在使用和進一步加熱前，應事先將培養基放置到室溫。
3.培養基的實驗室製備
3.1總則
正確製備培養基是微生物檢驗的最基礎步驟之一。使用脫水培養基和其他成分，尤其是含有有毒物質（如膽鹽或其他選擇劑）的成分時，應遵守良好實驗室規範和生產廠商提供的使用說明。培養基的不正確製備會導致培養基出現質量問題。
使用商品化脫水合成培養基製備培養基時，應嚴格按照廠商提供的使用說明配置。記錄所有相關數據，如質量/體積、pH、製備日期、滅菌條件和製備人員等。
使用各別成分製備培養基時，應按照配方準確配製，記錄所有細節信息，如：培養基名稱和類型及試劑級別、每個成分物質含量、製造商、批號、pH、培養基體積（分裝體積）、無菌措施（包括實施的方式、溫度及時間）、配置日期、人員等，以便溯源。
3.2水
除特定要求，實驗室用水的電導率在25℃下應不高於25μS/cm （相當於電阻率注0.4MΩcm)。
微生物汙染應不超過103CFU/mL，最好低於102CFU/mL。
3.3稱量和複水
稱量所需量的脫水培養基（注意防止吸入粉末，尤其是含有有害物質的培養基粉末），先加入少量水，充分混合（莊意避免培養基結塊）後再加水至所需的量。
3.4溶解和分裝
脫水培養基加水後適當加熱，並不停攪拌使其快速溶解，必要時，重新溶解。含瓊脂的培養基在加熱溶解前應浸泡幾分鍾。
3.5pH的測定和調整
用pH計測定pH，必要時在滅菌前調節pH，除特殊說明外，培養基滅菌後冷卻至25℃時，要求pH的變化不超過0.2pH單位。通常使用濃度約為40g/L（約1mol/L）的氫氧化鈉溶液或濃度約為36.5g/L（約1mol/L）的鹽酸溶液調節pH。如果滅菌後調節pH，溶液需滅菌。
注：商品化培養基在高壓滅菌前後pH可能發生明顯變化，但使用蒸餾水或去離子水時，滅菌前無需調節pH。
3.6分裝
將配置好的培養基分裝到適當的容器中，容器的體積至少為培養基體積的1.2倍。
3.7滅菌
3.7.1概述
培養基和試劑的滅菌通常采用濕熱滅菌（3.7.2）或過濾滅菌（3.7.3）。
有些培養基無需高壓滅菌，可煮沸滅菌。如，含亮綠的腸道菌培養基對光和熱特別敏感，應在煮沸後快速冷卻，避光保存。同樣，一些試劑則不需滅菌，直接使用（參見相關標準或生產廠商的使用說明）。
3.7.2濕熱滅菌
濕熱滅菌在高壓鍋或培養基製備器中進行。高壓滅菌一般采用121℃±3℃滅菌15min。如果培養基的體積超過1000mL，要對滅菌條件進行適當的調整。所有操作均要按照標準和使用說明的規定進行。
注：大容量培養基（＞1000mL）滅菌時可能會造成過度加熱。
加熱後應采取適當的方式冷卻，防止沸溢。這對大容量培養基和敏感性培養基（如含亮綠的培養基）是非常重要的。
3.7.3過濾災菌
過濾滅菌可以在真空負壓或正壓條件下進行。使用無菌設備和0.2um孔徑的濾膜。將過濾裝置的各個部分消毒滅菌，或使用預消毒設備。
一些濾膜上附著蛋白質或其他物質（如抗生素）。為達到有效過濾，應事先將濾膜用無菌水潤濕。
3.7.4監測
應對經濕熱或過濾滅菌的培養基進行監測，尤其要對pH、色澤、滅菌效果和均勻度等指標進行監測。
3.8添加劑的製備
製備含有有毒物質（特別是抗生素）的添加成分時，應小心操作，避免因粉末的擴散造成實驗人員過敏或發生其他不良反應。采用適當的預防措施並小心按照產品使用說明操作。不要使用過期的試劑；抗生素工作溶液現配現用；批量配置的抗生素溶液分裝後可冷凍保存，但解凍後的貯存溶液不可再次冷凍；廠商應提供冷凍對抗生素活性影響的相關資料，也可由使用者自行測定。
4.培養基的使用
4.1瓊脂培養基的融化
將培養基放到沸水浴中或采用其他有相同效果的方法（如高壓鍋中的蒸汽）融化。經過高壓滅菌的培養基盡量減少重新加熱的時間，避免過度加熱。培養基融化後立即移開，室溫靜置片刻（約2min)，以免玻璃容器發生破裂。
融化後的培養基放人47℃～50℃恒溫水浴鍋中保溫，冷卻到47℃～50℃所需的時間取決於培養基的類型、體積和在水在鍋裏的分裝量。融化後的培養基應盡快使用，放置時間一般不超過4h。剩餘的培養基凝固後不得再次融化使用。特別是靈敏性培養基，應根據相關標準，縮短融化後放置的時間。
將瓊脂培養基倒人類似檢測培養基使用的獨立容器中，插入溫度計，記錄並保存瓊脂的融化、溫度。加入樣品的培養基應將溫度調節到44℃～47℃，或按照相關標準調節溫度。
4.2培養基的脫氣
必要時，在使用前將培養基放到沸水浴或蒸汽浴中加熱15min，加熱時鬆開容器蓋子；加熱後蓋緊蓋子，並迅速冷卻至使用溫度。
4.3添加成分的加入
對熱不穩定的添加成分應在培養基冷卻至47℃~50℃時加人。滅菌的添加成分加入前應冷卻至室溫，避免冷的液體會造成瓊脂凝膠或形成片狀物。將添加成分緩慢加入培養基並充分棍勻，盡快分裝到待用的容器中。
4.4平板的製備和儲存
傾注融化後的培養基到平皿中，使之在乎皿中形成一個至少3mm厚度的瓊脂層（直徑90mm的平皿通常要加入18mL～20mL瓊脂培養基），或根據相關標準要求製備平皿。將平皿蓋好皿蓋後放置在水平平麵使瓊脂冷卻凝固。如果平板要儲存、培養時間超過48h或培養溫度超過40℃，要增加培養基的傾注量。
注：在培養過程中，瓊脂培養基會損失水分，在某些環撓條件下會影響微生物的生長。造成培養基水分損失的因素很多，如培養基的成分、平皿中培養基的量、培養箱的類型（如使用帶鳳扇的培養箱）、培養箱裏的空氣濕度、平皿在培養箱中放置的位置和數量以及培養溫度等。
凝固後的培養基應立即使用或存放在防止其成分發生變化的條件下，如存放於暗處和（或）5℃±3℃冰箱的密封袋中（見4.2）。在平板的底部或側麵做好標記，標記的內容包括培養基名稱、製備日期和（或）有效期。也可使用適宜的培養基編碼係統進行標記。
將傾注好的平板放在密封袋中冷藏可延長儲存期限。為了避免冷凝水的產生，平板應冷卻後再裝人密封袋中。貯存前不要對培養基表麵進行幹燥處理。
對於采用表麵接種的固體培養基，應先對瓊脂表麵進行幹燥：揭開平皿蓋，將平板倒扣於烘箱／培養箱中（溫度設置為25℃～50℃）；或放在有對流風的無菌淨化台中，直到培養基表麵的水滴消失為止。注意不要過度幹燥。商業化的平板瓊脂培養基應按照廠商提供的說明使用。
4.5培養基的棄置
所有汙染和未使用的培養基的棄置應采用安全的方式，並符合相關法律法規的規定。
5.最終培養基的性能測試
5.1概述
最低標準參見5.2和5.3；實際上，食物和水中可能含有應激微生物。培養基對應激微生物複蘇的反應的適應性應考慮在內。
5.2物理質量控製
見下一篇。
5.3微生物質量控製
5.3.1汙染的控製
從每批製備好的培養基中選取適量進行汙染測試。
5.3.2測試菌株
測試菌株是具有其代表種的穩定特性並能有效證明實驗室特定培養基最佳性能的一套菌株。測試菌株主要購置於標準菌株保藏中心，也可是實驗室自己分離的具有良好特性的菌株。實驗室應檢測和記錄標準儲備菌株的菌株特性，新複蘇的菌株可能會有非特異性反應，使用時應引起注意；最好使用從食物或水中分離得到的菌株。
每種培養基的測試菌株應包括：
一一具有典型反應特性的強陽性菌株；
一一弱陽性菌株（如對培養基中選擇劑等試劑敏感性強的菌株）；
一一顯示陰性特性的菌株；
一一部分或完全抑製菌株。
5.3.3即用型培養基和試劑
商業化即用型培養基的生產商如果通過ISO9000體係認證，應在適當位置有質量聲明並提供培養基的品質證書。這樣，使用者無需進行大量的培養基測試工作，但應確保貯存條件與廠商推薦的一致。即用型培養基至少要求進行定性測試。
5.3.4商品化脫水合成培養基製備的培養基
對分離和計數培養基而言，至少應進行半定量測試。對於鑒別培養基而言，隻需進行定性測試。定量測試對培養基的質量有更高的保證。
不含指示劑和選擇劑的培養基，隻需用陽性測試菌株進行檢測。含有指示劑和選擇劑的培養基，應使用能證明其指示和選擇功能的菌株進行檢測。複合培養基（即加入添加成分的培養基）應用具有5.3.2列舉的特性的菌株逐批進行驗證。
5.3.5各別成分製備的培養基
建議除了按照5.3.4中進行定性測試外，還應進行定量測試以監控基礎材料的質量，培養基的生長率和實驗室內部的配製規範。
培養基的質量保證一一疑難解答
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異常現象 |
可能原因 |
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培養基不能凝固 |
培養基製備過程中過度加熱 pH值造成培養基酸解 瓊脂使用量不正確 瓊脂未完全溶解培養基成分未充分混勻 |
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pH值不正確 |
培養基製備過程中過度加熱 水質不佳 外部化學物質汙染 在不正確溫度下測量pH值 pH計未正確校準 脫水培養基質量差 |
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顏色異常 |
培養基製備過程中過度加熱 水質不佳 脫水培養基質量差 pH值不正確外來汙染 |
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產生沉澱 |
培養基製備過程中過度加熱 水質不佳 脫水培養基質量差 pH未正確控製 如果是各別成分製備的培養基一一原材料不純 |
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培養基出現抑製/生長率低 |
培養基製備過程中過度加熱 脫水培養基質量差 水質不佳配方使用不對，如，培養基成分稱量不準確，添加物濃度不正確 容器或水中含有害殘留物 |
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選擇性差 |
培養基製備過程中過度加熱 脫水培養基質量差 配方使用不對 添加成分不正確，如加入添加成分時培養基過熱或添加濃度錯誤 添加物被汙染 |
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汙染 |
滅菌不充分 無菌操作有誤 添加物被汙染 |
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