革蘭氏染色液原理及實驗現象

一、試驗原理：

 用於細菌的革蘭氏染色試驗。

 通過結晶紫初染和碘液媒染後，在細胞壁內形成了不溶於水的結晶紫與碘的複合物，革蘭氏陽性菌由於其細胞壁較厚、肽聚糖網層次較多且交聯致密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時，因失水反而使網孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會出現縫隙，因此，能把結晶紫與碘複合物牢牢留在壁內，使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯度差，在遇脫色劑後，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而鬆散的肽聚糖網不能阻擋結晶紫與碘複合物的溶出，因此通過乙醇脫色後仍呈無色，再經沙黃等紅色染料複染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。

二、培養基配方（g/L）：

 革蘭氏染色液A液：

結晶紫 1.0g	95%乙醇	20.0ml
	1%草酸銨水溶液	80.0ml

 革蘭氏染色液B液：

碘	1.0g
碘化鉀	2.0g
蒸餾水	300ml

 革蘭氏染色液C液：

95%乙醇

 革蘭氏染色液D液：

沙黃	0.25g
95%乙醇	10.0ml
蒸餾水	90.0ml

三、試驗方法：

 1.如果樣品來自肉湯培養物：挑取1-2環肉湯培養基至潔淨載玻片上，不需要塗布開，在空氣中自然幹燥樣品液。如果樣品來自平板培養物：用接種環挑取1環蒸餾水至潔淨載玻片上，挑取一個單菌落，與蒸餾水混合均勻，塗布於載玻片上，盡可能塗布均勻，且不要太厚，空氣中自然幹燥菌液。

 2.塗布經火焰固定，加（結晶紫溶液）溶液A染1分鍾，水洗。

 3.加（碘液）溶液B染色1分鍾，水洗。

 4.加（脫色液）溶液C，不時搖動載玻片約10-30秒，至無紫色脫落為止，水洗。

 5.加（複染液）溶液D,染1分鍾，水洗。

 6.幹後油鏡鏡檢。革蘭氏陽性菌呈暗紫色至紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色至淡紅色。

四、結果觀察與解釋

 接種以下質控菌株：

 革蘭氏染色液微生物質控結果：

五、注意事項

 本培養基僅為細菌鑒定的一部分，需做其他補充試驗。

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