一、目的要求
1 ．學習並掌握觀察放線菌形態的基本方法．
2 ．初步了解放線菌的形態特征，
二、基本原理
放線菌是指能形成分枝絲狀體或菌絲體的一類革蘭氏陽性細菌，常見放線菌大多佬形成菌嫂體，緊貼培養基表麵或深入培養基內生長的叫基內菌欽（簡稱“基絲”，) ，基絲生長到一定階段還能向空氣中生長出氣生菌絲〔 簡稱“氣絲”) ，並進一步分化產生孢子絲及孢子。有的放線菌隻產生基稗而無氣越。在顯微鏡下直接觀察時，氣處在上層、基絲在下層，氣理色暗，墓絲較透明．孢子絲依種類的不同，有直波曲、各種螺旋形或輪生．在油鏡下觀察，放線菌的孢子有球形、橢圓、杆狀或柱狀．能否產生菌絲體及由菌絲體分化產生的各種形態特征是放線菌分類鑒定的重要依據．為了觀察放線菌的形態特征，人們設計了各種培養和觀察方法，這些方法的主要目的是為了盡可能保持放線菌自然生長狀態下的形態特征．本實狡介紹其中幾種常用方法．扡片法：將放線菌接種在瓊脂平板上，扡上滅菌蓋玻片後培養，使放線菌菌絲沿著培養基表麵與蓋玻片的交接處生長而附著在蓋玻上．觀察時，輕輕取出蓋玻片，t 於載玻片上直接鏡檢．這種方法可觀察到放線菌自然生長狀態下的特征，而且便於觀察不同生長期的形態．玻璃紙法；玻璃紙是種透明的半透膜，將滅菌的玻璃紙班蓋在瓊脂平板表麵，然後將放線菌接種於玻璃紙上，經培養，放線菌在玻璃紙上生長形成菌苔，觀察時，揭下玻璃紙，固定在載玻片上直接鏡檢．這種方法既能保持放線菌的自然生長狀態，也便於觀察不同生長期的形態特征。印片法將要觀察的放線菌的菌落或菌穀，先印在載玻片上，經染色後觀察．這種方法主要用於觀察飽子絲的形態，孢子的排列及其形狀等．方法簡便、但形態特征可能有所改變，
三、器材
l 菌種 細黃鏈黴菌或青色鏈黴菌．弗氏鏈黴菌。
2 ，培養基 滅菌的高氏I 號瓊脂
3 ．儀器或其他用具 經滅菌的：平皿、玻璃紙、蓋玻片、玻璃塗棒，以及載玻片，接種環，接種鏟，鑷子，石炭酸複紅染液，顯微鏡等。
四、操作步驟
1.扡片法
( 1 ）倒平板 取融化並冷至大約50 ℃ 的高氏1 號瓊脂約20 而倒平板，凝固待用．
（2）接種用接種環挑取菌種斜麵培養物（孢子）在瓊脂平板上劃線接種．
（3）扡片以無菌操作用鑷子將滅菌的蓋玻片以大約45 。角扡人瓊脂內（扡在接種線上），扡片數量可根據需要而定，
( 4 ）培養將扡片平板倒置，28 ℃ 培養，培養時間根據觀察的目的而定、通常3 ~5d ．
( 5 ）鏡檢 用鑷子小心拔出蓋玻片，擦去背麵培養物，然後將有菌的一麵朝上放在載玻片上，直接鏡檢．
2 玻璃紙法
( l ）倒平板 同扡片法．
( 2 ）鋪玻璃紙 以無菌操作用鑷子將已滅菌（155～160 ℃ 幹熱滅菌2h ）的玻璃紙片（似蓋玻片大小）鋪在培養簽瓊脂表麵，用無菌玻璃塗棒（或接種環）將玻璃紙壓平，使其緊貼在瓊脂表麵，玻璐紙和瓊脂之間不留氣泡。每個平板可鋪5 ~ 10 塊玻璃紙．
也可用略小於平皿的大張玻璃紙代替小紙片，但觀察時需要再剪成小塊．
( 3 ）接種 用接種環挑取菌種斜麵培養物（孢子〕 在玻璃紙上劃線接種．
( 4 ）培養 將平板倒裏，28 ℃ 培養3~5d .
（5）鏡檢 在潔淨載玻片上加一小滴水，用攝子小心取下玻璐紙片，菌麵朝上放在玻片的水滴上，使玻璃紙平貼在玻片上（中間勿留氣泡），先用低倍鏡觀察，找到適當視野後換高倍鏡觀察。
操作過程，勿碰動玻璃紙麵上的培養物．
3 ．印片法
( 1 ）接種培養 用高氏I 號瓊脂平板，常規劃線接種或點種，28 ℃ 培養4 ~ 7 d ．也可用上述兩種方法所使用的瓊脂平板上的培養物，作為製片觀察的材料．
( 2 ）印片 用接種鏟或解剖刀將平板上的菌苔連同培養基切下一小塊，菌麵朝上放在一載玻片上．另取一潔淨載玻片裏火焰上微熱後，蓋在菌苔上。輕輕按壓，便培養物（氣性、孢子絲或孢子）枯附（“印”）在後一塊載玻片的中央，有印跡的一麵朝上，通過火焰2 ~3 次固定．
( 3 ）染色用石炭酸複紅覆蓋印跡，染色約1min後水洗．
（4）鏡檢 幹後用油鏡觀察．
五、實驗報告
! ．結果
繪圖說明你所觀察到的放線菌的主要形態特征．
2 ．思考題
( l) 試比較三種培養和觀察放線菌方法的優缺點。
( 2 ）玻璃紙培養和觀察法是否還可用於其他類群微生物的培養和觀察？為什麽？
（3）鏡檢時，你如何區分放線菌的基內菌絲和氣生菌絲？
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