一、目的要求
學習並掌握莢膜染色法．
二、基本原理
莢膜是包困在細菌細胞外的一層粘液狀或膠質狀物質，其成分為多特、糖蛋白或多肽．由於莢膜與染料的親和力弱、不易粉色；而且可溶於水，易在用水衝洗時被除去．所以通常用襯托染色法染色，使菌休和背景著色，而莢膜不著色，在菌體周圍形成一透明圈。由於莢膜含水t 高，製片時通常不用熱固定，以免變形影響觀察．
下麵介紹3 種莢膜染色法，其中濕墨水法較簡便、並適用於各種有莢膜的細曲．
三、器材
l 菌種 揭球固氮菌或膠質芽孢杆菌約2d 無氮培養基瓊脂斜麵培養物。
2 染色劑 繪圖墨水（上海墨水廠的滬光繪圖墨水效果較好；必要時用濾紙過旅後使用）, 1 ％甲基紫水溶液．1 ％結晶紫水溶液，6 ％葡萄糖水溶液，2 嘛硫酸銅水溶液，甲醇．
3 ．儀器或其他用具載玻片，蓋玻片，濾紙，顯微鏡等。
四、操作步驟
（一）濕墨水法
1 製備菌和口水混合液
加一滴墨水於潔淨的載玻片上，然後挑取少量菌體與其混合均勻．
2 ．加蓋玻片
將一潔淨蓋玻片蓋在混合液上，然後在蓋玻片上放一張漁紙，輕輕按壓以吸去多餘的混合液．
加盆玻片時勿．氣泡，以免影響觀察．
3 ．鏡檢
用低倍鏡和高倍鏡觀察，若用相差顯微鏡觀察．效果更好．
背景灰色，菌體較暗，在菌體周圍呈現明亮的透明圈即為莢膜．
（二）幹墨水法
l 製混合液
加一滴6 ％葡萄塘液於潔淨載玻片的一端，然後挑取少量 菌體與其很合，再加一環墨水，充分混勻．
玻片必須潔淨無油跡．否側，塗片時混合液不能均勻散開
2 ．塗片
另取一端邊緣光滑的載玻片作推片，將推片一端的邊緣裏於混合液前方，然後稍向後拉，當推片與混合液接觸後，輕輕左右移動，使之沿推片接觸的後緣散開，爾後以大約300 角迅速將混合液推向玻片另一端，使混合液鋪成薄層
3 ．幹燥
空氣中自然千燥．
4 ．固定
用甲醇浸沒塗片固定一分鍾．傾去甲醇．
5 ．幹燥
在酒精燈上方用文火幹燥．
6 ．染色
用甲基紫染1~2min
7 水洗
用自來水輕輕衝洗，自然幹燥．
8 ．鏡檢
用低倍和高倍鏡觀察．
背景灰色．菌體紫色，菌體周圍的清晰透明圈為莢膜．
（三）Anthony 氏法
1 ．塗片
按常規取菌塗片。
2 ．固定
空氣中自然幹燥。不可加熱幹燥固定。
3 ．染色
用l ％的結晶紫水溶液染色2 min．
4 ．脫色
以20 ％的硫酸銅水溶液衝洗．用吸水紙吸幹殘液．
5 ．鏡檢
幹後用油鏡觀察．
菌體染成深紫色，菌體周圍的莢膜呈淡紫色。
五、實驗報告
l ，結果
繪圖說明你所觀察到的細菌的菌體和莢膜的形態：
2 ．思考題
( l ）試比較三種莢膜染色法的優缺點．
( 2 ）通過莢膜染色法染色後．為什麽被包在莢膜裏麵的菌體著色而莢膜不著色？
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