目的要求
1 ．學習並掌握芽孢染色法．2 ．初步了解芽孢杆菌的形態特征，
二、基本原理
芽孢又叫內生孢子，是某些細菌生長到一定階段在菌體內形成的休眠體，通常呈國形或肺圈形．細曲能否形成芽孢敘及芽孢的形狀芽孢在芽孢囊內的位t 、芽鵝班是否膨大等特征是鑒定細菌的依據之一
由於芽孢壁厚、透性低上不易著色．當用石炭酸複紅．結晶紫等進行單染色時，菌體和芽孢囊著色，而芽孢囊內的芽孢不著色或僅顯很淡的頗色，遊離的芽孢呈淡紅或淡藍紫色的圈或捕圈形的圈，為了使芽孢粉色便於觀察．可用芽孢染色法。
芽孢染色法的基本原理是：用著色力強的染色荊孔雀綠或石炭酸複紅，在加熱條件下染色，使染料不僅進人藺體也可進人芽孢內，進人菌體的染料經水洗後被脫色，而芽袍一經普色難以被水洗脫，當用對比度大的友染荊染色後，芽孢仍保留初染劑的頗色，而菌體和芽孢囊被染成複染劑的顏色，使芽袍和菌體更易於區分
三、器材
1 ．菌種 蠟樣芽孢杆菌約2d 百養瓊脂斜麵培養物，球形芽袍杆菌1~2d 營養瓊脂斜麵培養物．
2 ．染色荊5 腸孔雀綠水溶液，0 . 5 ％番紅水溶液。
3 ．儀器或其他用具小試管．滴管，燒杯，試管架，載玻片，木夾子，顯微鏡等．
四、操作步驟
（一）改良的Schaeffer-Fulton氏染色法
1 ．製備菌懸液
加1~2 滴水於小試管中，用接種環挑取2 ~3 環菌苔於試管中，攪拌均勻，製成濃的菌懸液．
2 染色
加孔雀綠染液2~3 滴於小試管中，並使其與菌液混合均勻，然後將試管置於沸水浴的燒杯中，加熱染色15~20 mm 。
3 塗片固定
用接種環挑取試管底部菌液數環於潔淨載玻片上，塗成薄膜，然後將塗片通過火焰3 次溫熱固定。
4 脫色
水洗．直至流出的水無綠色為止．
5 ．複染
用番紅染液染色2~3min ，傾去染液並用濾紙吸幹殘液．
6 ．鏡檢
幹澡後用油鏡觀察．
芽孢呈綠色，芽孢囊及營養體為紅色．
(二〕 Schaeffer-Fulton氏染色法
1 ．製片
按常規塗片、下燥、固定，
2 ．染色
加數滴孔雀綠染液於塗片上，用木夾夾住載玻片一端，在微火上加熱至染料冒燕氣並開始汁時．維持5min .
加熱過程中及時補充染液．切勿讓塗片幹涸．
3 ．水洗
待玻片冷卻後，用緩流自來水衝洗，直至流出的水無色為止。
4 ．複染
用番紅染液複染2min .
5 水洗
用緩流水洗後，吸幹，
6 ．鏡檢
幹後油鏡觀察。
芽孢呈綠色，芽孢囊及營養體為紅色．
五、實驗報告
1 ．結果
繪圖表示兩種芽孢杆茵的形態特征（注意芽孢的形狀、著生位置及芽孢囊的形狀特征）. 2 ．思考題
( l ）說明芽孢染色法的原理．用簡單染色法能否觀察到細苗的芽孢？
( 2 ）用Schaefrer 一Fulton 氏染色法加熱染色時，若因一時疏忽玻片上的染液被烘千，此時能否立即補加染液？為什麽？
( 3 ）若塗片中觀寮到的隻是大且遊離芽孢，很少看到芽孢襲及營養細胞，你認為這是什麽原因？
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