在藥品的生產、包裝、運輸、存儲等環節中，一些外在的因素會造成微生物對藥品的汙染，進而對人體造成各種危害。非無菌藥品微生物限度檢查是對非滅菌製劑及其原料、輔料受微生物汙染程度的一種檢查方法。本文就該檢查方法所受到的影響因素進行了分析，以期最大限度地保證檢驗結果的可靠性和準確性。
藥品是防病治病、保護人民健康的特殊商品。對非無菌藥品，可允許該藥品含有一定數量的活的微生物，但其含菌數量不能超過《中國藥典》2015年版四部通則規定的非無菌藥品微生物限度標準。
在藥品的生產、包裝、運輸、存儲等環節中，由於空氣、水、原輔料、包裝材料、生產工藝、人員等因素，會存在非無菌藥品中微生物或者微生物的代謝產物含量超標，而引起藥品的汙染、變質。通常，這些微生物包括細菌、黴菌、酵母菌，其中大量是與致病菌和產毒菌有關的菌屬，如大腸杆菌、沙門菌、葡萄球菌、青黴、黃曲黴等。
由於原輔料、生產工藝不同，不同類型的藥品會被不同種類的微生物所汙染。微生物種類越多，藥品變質、失效的可能性越大，最終會對人體造成感染、發熱、過敏、中毒等危害。非無菌藥品微生物限度檢查，是對非滅菌製劑及其原料、輔料受微生物汙染程度的一種檢查方法。對藥品中微生物限度的檢查，是評價生產企業的藥用原料、輔料、設備、器具、工藝流程、生產環境和操作者衛生狀況的重要手段和依據，也是控製和提高藥品質量、保證人民群眾安全用藥的一項重要舉措。目前，藥品微生物限度的檢查包括：中成藥類、化學藥品類、生化藥品類的非規定滅菌製劑，藥用原料及輔料，中藥提取物及中藥飲片。
為了保證檢測結果的真實、準確，在非無菌藥品微生物限度的檢查過程中，應注意以下四個方麵的影響：（1）被汙染藥品中微生物的特殊性；（2）藥品原汙染狀態的保持；（3）藥品微生物限度檢查方法的適用性試驗；（4）檢驗人員素養的強化。
1.被汙染藥品中微生物的特殊性
1.1菌體易變性
藥品中菌體細胞的生長易受到外界環境的幹擾，菌體細胞在藥品中處於不穩定狀態，它可隨存放時間的延長而死亡，也可在適宜條件下增殖。因此，在適宜的標準化條件下，一定時間內藥品的汙染量才會處於動態平衡，才可以評估總體汙染的狀況。
1.2分布不均勻性
除在生產前期的汙染外，其它環節所造成的微生物汙染都是局部的。因此，同批次產品中不同包裝內的汙染狀態就會有差異，采取合理的抽樣方法才能保證檢驗結果的代表性、準確性。
1.3菌體易受損
由於微生物受到原料處理、加工等操作程序的影響，或者藥品本身對微生物的抑殺作用，會使多數微生物處於受損壞狀態。這些受到損壞的微生物用一般的方法檢查，往往會出現假陰性或計數偏低的結果。
1.4受幹擾因素複雜
因為汙染菌的來源多、種類多，而且藥品種類多、劑型成分複雜，所以在不同的藥劑中，測定同一種菌往往會得到不同的結果。
2.藥品原汙染狀態的保持
檢驗過程中保持檢驗藥品的原汙染狀態，可使檢驗結果更加準確可靠。因而在檢驗過程中必須嚴格規範操作，以免藥品二次汙染，導致菌細胞再繁殖或死亡。
2.1檢驗環境的影響
微生物限度檢查應有單獨的潔淨實驗室，潔淨實驗室應放在二層樓以上，遠離汙染源。每個潔淨實驗室應有獨立的淨化空氣係統，其環境潔淨度不應低於10000級，局部潔淨度為100級。室內的溫度應控製在l8～26oC， 相對濕度應控製在40%～60%。每次操作前後都要用0.1%苯紮溴銨溶液或其他適宜消毒液， 擦拭操作台及可能汙染的死角，然後啟動層流淨化裝置。緩衝間內應有洗手盆及無菌的實驗服、帽、口罩、鞋套。操作台應備有天平、酒精燈、火柴、酒精棉球、助吸器等設備。
檢驗用陽性菌操作應在獨立的陽性菌實驗室內進行， 不得與供試品檢驗共用同一個潔淨實驗室，避免交叉汙染。
2.2檢驗材料及用具的影響
用作酒精棉球的脫脂棉應在高壓滅菌後再加入75%的酒精使用。培養基在使用前需做培養基適用性檢查，且培養基和稀釋液每次根據樣品數量的多少配製。未使用完的新配培養基應在2～8oC避光冷藏條件下保存， 一般固體培養基保存不超過兩周，液體培養基保存不超過四周，部分鑒定培養基保存不超過60d。培養基經滅菌後應進行預培養，以保證培養基的無菌度。
操作過程中所用的器皿均應洗滌幹淨後用牛皮紙包紮嚴密滅菌。經高壓蒸汽滅菌的物品取出時切勿立即置於冷處，避免因急速冷卻，使滅菌物品內蒸汽冷凝造成負壓易染菌，取出後應放置在恒溫培養箱中烘幹，待用。
各種恒溫恒濕培養箱除定期檢定外，還應每天觀察箱內溫度及濕度波動的範圍。高壓蒸氣滅菌器在每次使用時，應放入指示膠帶或指示卡，利用其變色情況，判斷是否在設定的溫度與壓力條件下達到滅菌效果。此外，對各種器械及設備均應有定期計量與檢定記錄，以保證正常使用。
3.藥品微生物限度檢查方法的適用性試驗
在藥品微生物限度檢查前，需對其檢查方法的適用性進行驗證。根據《中國藥典》2015年版四部通則非無菌產品微生物限度檢查方法（通1105、通則1106）[1]的要求，需對微生物計數方法適用性、控製菌檢查法適用性進行驗證。
3.1微生物計數方法適用性試驗
目前,平皿傾注法、薄膜過濾法及最可能數法是藥品微生物計數的常用方法。平皿傾注法適用於抑菌作用弱或無抑菌功效的藥品，是試驗中最常用的方法，也是方法適用性試驗的首選；薄膜過濾法適用於抑菌作用較強的藥品；最可能數法因其精確度和準確度不及薄膜過濾法和平皿傾注法，更適用於某些受微生物汙染量很小的供試品。在供試品的檢查中，需要基於供試品的物理化學特性和微生物的限度標準，挑選操作簡便、準確度高的方法，且應考慮供試品的抑菌性。另外，在培養基（或稀釋液）滅菌前加入中和劑、滅活劑或表麵活性劑，可用來消除幹擾物抑菌的作用，避免損傷汙染供試品的微生物。以上方法選擇後，應對所選方法的適用性進行確認。
3.2控製菌檢查法適用性試驗
控製菌檢查法是在特定的環境下，對供試品中是否含有規定的致病性微生物進行檢測。《中國藥典》規定檢查的控製菌有：耐膽鹽革蘭陰性菌、大腸埃希菌、沙門菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、梭菌、白色念珠菌。在常規法中，需在培養基中加入
確定量的供試液和陽性試驗菌（數量不大於100cfu）。對抑菌作用較強的藥品，應采用薄膜過濾法。在具體的操作中，在集菌培養器中先過濾供試液，再利用衝洗液衝洗。在衝洗完畢後，向集菌培養器中加入陽性試驗菌和規定的培養基。之後，在規定條件下進行微生物的培養和結果的判定。另外，應以稀釋液替代供試液，按照前述方法同步進行陰性對照實驗，以保證實驗結果的準確性。
4.檢驗人員素養的強化
檢驗人員在藥品檢驗的過程中應始終牢記無菌觀念。每次實驗前，應對穿著的無菌服裝進行高壓滅菌處理，對工作環境使用紫外線照射30min，並使用消毒液擦拭超淨工作台麵。在操作完畢後，應對工作環境進行上述消毒、滅菌處理。
綜上，藥品微生物限度檢查工作是一項涉及知識麵廣，技術性高，影響因素多的工作。檢查結果能否反映藥品受微生物汙染程度的真實性，除了本文所提到的諸多因素外，操作人員還必須掌握一定的微生物基本知識和熟練的無菌操作技術，嚴格按照《中國藥典》2015年版四部中非無菌藥品微生物限度檢查法的規定進行操作，才能最大限度地保證檢驗結果的真實和準確，保障人民群眾的安全用藥。
本文來自蘭州藥檢所 劉荔等
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