菌種保藏是微生物學工作者的重要研究手段之一,其目的是把菌株的原始性狀和優良性狀保存下來,防止死亡、退化或雜菌汙染。菌種保藏方法很多,現簡單介紹幾種:
1.低溫保藏法
固體斜麵抱子,液體抱子,麩皮,大米,小米或玉米粉等材料製備的抱子等,都可用4℃左右低溫冰箱保存,時間在30~60天(根據菌種穩定性而定),也可在棉塞上浸蠟,一般可達3~4個月,至半年之久。
2.低溫定期移植保存法
這是一種經典的簡易保存法,即菌種接種於所要求的斜麵培養基上,置最適溫度下培養,至所需要的發育階段後,置於低溫,幹燥處保存,每隔3~6個月移植培養一次(具體視菌種特性而定)。
除斜麵定期移植外,還有穿刺培養定期移植法,對大腸杆菌,極毛芽抱杆菌效果良好,穿刺培養基瓊脂的含量比常用量少1/2(約0.6 %~0.8%)。
3.液體石蠟法
選用優質純淨的液體石蠟,經121℃高壓滅菌2 h,然後170℃幹熱處理1~2 h,以除水分,冷卻後加到斜麵上,覆蓋以超過斜麵為宜。菌種用的試管塞為橡皮塞,並用蠟封上,放陰涼室溫處即可。
4.砂土保藏法
(1)砂土載體準備:將黃砂用自來水浸泡洗滌數次,使pH為中性,然後濾出烤幹,用60目鋼絲篩除去粗粒備用,同時采用貧痔的深挖lm以下的土,自來水浸泡洗滌數次使pH中性,待沉澱後,棄去上清液,烤幹後輾末,120目過篩,將上述砂和土以1:1混合,裝入1.2 cm X lO cm安培管中,裝量為試管1/7左右,塞好棉塞,120℃高壓滅菌1 h,間歇滅菌5~6次,烤幹備用。
(2)菌種準備:取生長良好、孢子豐富的新鮮斜麵。需純菌,加滅菌蒸溜水2~2.5 ml,輕輕刮下孢子,吸0.2~0.3 ml到滅菌備用的沙土中,真空幹燥4~6 h,低溫4℃保存。適用於產芽孢的細菌、放線菌和真菌、可保藏5~7年。
5.冷凍幹燥法
這是菌種保藏比較理想的一種方法,適用千多種細菌和放線菌。在多數情況下,也適用於真菌、酵母、病毒、噬菌體、立克次氏體。它具有變異少,保藏時間長,輸送貯存方便之優點。
6.液氮超低溫保藏法
(1)材料:液氮冰箱或液氮法。
優質玻璃瓶安瓿管(規格7.5mm X 10mm)
液氮
(2)方法:將欲保藏的菌種懸液或菌塊(常用保護劑為10%甘油或5%~10%二甲基亞楓)密封於安瓿瓶內,先經控製致冷速度,預凍後,貯藏於-l5O℃至-196℃液氮冰箱中保存,保存期間需注意及時補充液氮。需恢複培養時,取出安瓶管急速放35~40℃溫水中,使其迅速融化後,打開,移種。這是一種保藏菌種的好方法,國外已廣泛使用。
本文節選自《常見細菌係統鑒定手冊》第十七章。
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