一、用途及介紹
用途:此培養基常用於藥品及生物製品中的需氧/厭氧菌檢驗及厭氧菌的增菌培養。
培養基狀態和性質:製備好的硫乙醇酸鹽流體培養基呈淡黃色透明流體狀,有一定黏度,上下分層。上層由於接觸空氣中的氧氣,培養基內含的刃天青顯淡紅色,需氧菌可在此處生長。下層為厭氧層,呈淡黃色,厭氧菌可在此處生長。
優點:硫乙醇酸鹽流體培養基中因含有少量瓊脂,培養基內無液體對流現象,且含有還原性的胱氨酸、硫乙醇酸鈉,因此可以穩定地保持下層的厭氧環境。在進行厭氧菌的增菌培養時,無需借助厭氧罐、厭氧培養箱等設備,也無需覆蓋液體石蠟,即可達到良好的培養效果,因此非常適合用於厭氧菌的複蘇及增菌培養。
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二、使用方法及注意事項
培養基製備:參照標簽,按比例稱取培養基加熱溶解於純化水中,分裝至試管或瓶中,121℃高壓滅菌,冷卻後備用。
注意事項:
1.培養基中含有少量瓊脂,因此在滅菌前需加熱煮沸至培養基內的瓊脂完全溶解且分布均勻,方可進行分裝,滅菌;
2.培養基分裝容器時,裝量應與容器比例合適,選擇細高型容器分裝更有利於減少氧化層的高度,若分裝密閉容器中空氣較多,可充入氮氣後再進行密封;
3.使用前注意觀察培養基氧化層的高度,在供試品檢查前,培養基氧化層高度不能超過培養基深度的1/5;若超過1/5,可對培養基進行沸水浴加熱驅氧,隻限加熱一次;
4.硫乙醇酸鹽流體培養基不可振蕩培養,隻能靜置培養。振蕩會使培養基上下層產生液體對流,無法維持下層培養基的無氧狀態,因此會導致厭氧菌不能生長。
三、常見問題
1.製備好的培養基整瓶呈現淡黃色,看不到紅色氧化層是怎麽回事?
答:通常在密閉容器裏的硫乙醇酸鹽流體培養基會出現這個現象。硫乙醇酸鹽流體培養基上層隻有接觸氧氣才會變紅,若上層沒有氧氣接觸,就會整體呈淡黃色。自製密閉滅菌後的培養基,若容器內殘留空氣很少,或滅菌前進行了充氮氣排氧,滅菌後可能會看不到氧化層。
2.滅菌後培養基是澄清的,冷卻後出現部分白色絮狀物,是什麽原因?
答:硫乙醇酸鹽流體培養基內有少量瓊脂,如果配製不當,瓊脂未充分溶解分布均勻,滅菌冷卻後聚集的瓊脂凝固成團塊,就會出現白色絮狀物。因此在滅菌前必須加熱至瓊脂完全溶解並充分攪拌,使瓊脂在培養基中分布均勻,再進行高壓滅菌,冷卻後的培養基就是澄清的淡黃色透明流體狀。
3.滅菌後的培養基顏色偏深黃,且pH偏低不合格,是什麽原因?
答:這種情況一般是滅菌過度造成的。培養基中的酵母浸粉和葡萄糖在滅菌過度後易出現糖焦化現象,造成顏色偏深,pH下降,嚴重時可能觀察不到氧化層。因此在培養基滅菌結束後,需及時從滅菌鍋中取出,避免長時間滅菌或保溫,更不可重複高壓滅菌。
4.滅菌後的培養基,分裝試管使用時,整根試管變紅色,是否還能使用?
答:此培養基建議先加熱煮沸溶解,分裝,再滅菌。如先滅菌後分裝,由於分裝過程中培養基接觸氧氣,剛分裝結束時,部分培養基可能呈現全紅色,一般室溫靜置1h左右可重新見到分層現象。如靜置後仍然整體培養基呈紅色不分層,可沸水浴加熱驅氧,冷卻後即可重新出現分層。重新分層的培養基可正常使用。
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