1.培養基
|
肉汁腖培養基 |
1000ml |
|
KNO3 |
1g |
|
pH 7.0-7.6 |
|
每管分裝4-5 ml, 121℃蒸氣滅菌15-20 min。
2.試劑
（1）格裏斯氏(Griess）試劑
|
A液 |
|
|
對氨基苯磺酸 |
0.5g |
|
稀醋酸（10%左右） |
150ml |
|
B液 |
|
|
α-萘胺 |
0.1g |
|
蒸餾水 |
20ml |
|
稀醋酸（10%左右） |
150ml |
（2）二苯胺試劑：二苯胺0.5g溶於100 ml濃硫酸中，用20 ml蒸餾水稀釋。
3.接種
將測定菌接種於硝酸鹽液體培養基中，置適溫培養1,3,5天。每株菌作二個重複，另留兩管不接種作對照。
4.操作
取二支幹淨的空試管或在比色瓷盤小窩中倒入少許培養l,3,5天的培養液，再各加一滴A液和B液，在對照管中同樣加入A液，B液各一滴。
5.結果觀察
當培養液中滴入A,B液後，溶液如變為粉紅色、玫瑰紅色、橙色、棕色等表示亞硝酸鹽存在，為硝酸鹽還原陽性。如無紅色出現，則可加一、二滴二苯胺試劑，此時如呈藍色反應，則表示培養液中仍有硝酸鹽，又無亞硝酸鹽反應，表示無硝酸鹽還原作用；如不呈藍色反應，表示硝酸鹽和形成的亞硝酸鹽都已還原成其他物質，故仍應按硝酸鹽還原陽性處理。
6.注意事項
（1）還原硝酸鹽反應是在較為厭氧條件下進行的，雖不必用礦油封液麵，但分裝試管時液層不宜太薄，對生長緩慢的細菌尤應注意。
（2）對不同種的細菌來說，亞硝酸鹽可以是硝酸鹽還原的最終產物，也可以是整個 還原過程的中間產生，另一方麵，有的種還原極為迅速，有的種還原緩慢因而第一次檢查這一項目時要及時(18-24 h)，並且對陰性反應的菌株應連續觀察。並且對千未呈現亞硝酸鹽反應的測定應檢查是否仍有硝酸鹽（二苯胺測定），然後才能判斷有無硝酸鹽的還原反應。
本文節選自《常見細菌係統鑒定手冊》第十四章。
上一篇：纖維素分解
下一篇：脲酶的測定方法介紹
