一、菌落形態
1.平板製作將15～20 ml融化的營養瓊脂培養基冷卻至50℃左右，按無菌操作倒人直徑9 cm的培養皿內。如有冷凝水，倒置於30～37℃溫箱內，使之幹燥以便於單菌落的出現。
2.單菌落平板（劃線法）一點菌苔或一環細菌懸液，在上述無冷凝水的平板一側邊緣處，反複塗抹在直徑約為1 cm大小的麵積上；燒灼接種環，冷卻後，從上述塗菌處劃出7～8條直線，前3～4條線的從塗菌處劃出，後3～4條直線可不通過塗菌處，劃線時接種環與平板表麵成30°～40°角，輕輕接觸，不要使接種環劃破表麵；如上述燒灼、劃線操作再重複數次，以劃滿整個平板為宜；倒置平板，於最適溫度培養1～2天，出現單菌落。
3.菌落形態觀察 形狀和大小、邊緣、表麵、隆起形狀，透明度、菌落及培養基的顏色等。
二、生長溫度和耐熱性
最高、最適、最低和耐受溫度能力的特征常常是某些細菌鑒定的特征之一，常用的測定溫度(℃)有4,20,30,37,41,45和65。
以液體培養物(24h培養物）一小環轉入澄清營養肉汁或合適的液體培養基，置不同溫度培養。37℃以上的測定應置水浴中，需3次移種生長者才能確認。
耐熱性意味著細胞經受高溫還能存活，主要用於鏈球菌的鑒定。在1m1合適的肉湯或脫脂牛奶中接種1滴24小時的培養物，於60℃水浴30 min,然後於35～37℃培養48 h,生長者則表明存活，糞腸球菌(Enterococcous f aecalis)為該測定的陽性對照。
三、氧和二氧化碳的需要
氧和二氧化碳的需要，常以對氧要求的不同程度來區別細菌，例如好氧菌、微好氧菌和厭氧菌以及兼性厭氧。測定方法有兩種：
1.需氧性測定將接種的培養物培養於不同條件包括空氣、含5% CO2和10% O2厭氧罐中，分別測得需氧性。
2.芽孢菌厭氧性測定
（1）厭氧培養基
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酪素水解物 |
20g |
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NaCl |
5g |
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疏基醋酸鈉 |
1g |
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甲醛次硫酸鈉 |
1g |
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瓊脂 |
15g |
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蒸餾水 |
1000ml |
（2）接種與觀察：用一小環（外徑1.5mm的接種環）營養肉湯培養物穿刺於上述培養基，培養於30℃，3天和7天分別記載，僅在表麵生長者為好氧菌，如沿穿刺線牛長或下部生長者為兼性厭氧菌或厭氧菌。
本文節選自《常見細菌係統鑒定手冊》第十三章。
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