用途:用於支原體的分離培養。
支原體簡介
支原體結構簡單,缺乏細胞壁,僅有質膜,胞體內有核蛋白體以及一個由環形雙鏈DNA分子組成的原核。大小僅有0.1~0.3μm,最小直徑約為100毫微米,可通過濾菌器,會幹擾細胞培養等工作的進行。由於能形成絲狀與分枝形狀,故稱為支原體。
不同支原體利用的能源物質不同,如發酵葡萄糖的肺炎支原體、人型支原體等,水解精氨酸的口腔支原體等,還有利用尿素作為能源的解脲支原體。可利用發酵葡萄糖、水解精氨酸、水解尿素等生化反應鑒別支原體。
支原體營養要求一般比細菌高,除必須的基礎營養物質外,還需添加10%~20%的動物血清以提供支原體所需的膽固醇。由於大多數的支原體兼性厭氧,有些菌株在活化分離時保持5%~10%二氧化碳環境生長狀態更好。解脲支原體在厭氧條件下生長更好。
支原體無細胞壁,對滲透壓敏感,對抑製細胞壁合成的抗生素不敏感,因此可添加青黴素抑製細菌的生長。由於滲透壓突變會導致支原體破裂死亡,因此培養支原體時,維持適宜的滲透壓顯得格外重要。此外,在支原體培養中,pH也是重要因素。
肺炎支原體檢驗依據及培養基原理
支原體檢查法在2020年版《中華人民共和國藥典》中體現,要求使用支原體肉湯培養基培養監測肺炎支原體。具體操作要求為:將肺炎支原體稀釋至10-7~10-9,接種在支原體肉湯培養基中,每個稀釋度接種3支試管,置於36℃培養7-14天,觀察培養基變色結果。肺炎支原體可以發酵培養基中的葡萄糖,使培養基的pH值降低,遇指示劑酚紅使培養基變黃。
豬胃消化粉、牛肉浸粉、酵母浸粉提供碳氮源、維生素和生長因子;葡萄糖為可發酵的糖類;氯化鈉維持滲透壓;酚紅為指示劑。
成分(g/L)
豬胃消化物
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10.0
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牛肉浸粉
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5.0
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酵母浸粉
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5.0
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氯化鈉
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2.5
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葡萄糖
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5.0
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酚紅
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0.02
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pH值7.6±0.2
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25℃
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用法
稱取本品 27.52g,加熱溶解於 800ml 蒸餾水中,121℃高壓滅菌 15 分鍾,冷至室溫,無菌操作加入 滅活小牛血清或馬血清 200ml 和青黴素 80 萬單位,混勻,分裝無菌試管,備用。
支原體肉湯培養肺炎支原體12天的靈敏度
支原體肉湯培養基微生物靈敏度試驗:
按標簽用法製備培養基,接種以下質控菌株,放置36±1℃需氧培養7-14天。
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